Türkçe
English
Giriş
DNA çekirdekli her hücrede bulunur, bu sebeple uygun koşullarda toplanıp, muhafaza altına alınmış bütün biyolojik materyallerde bulunmaktadır. Biyolojik örneklerden (kan, doku, tükürük vb.) alınan numunelerden elde edilen hücrelerin hücre zarı kimyasal maddeler ve enzimlerle parçalanıp DNA ortaya çıkarılır; bu işleme ‘DNA veya RNA Ekstraksiyonu’ denir.
DNA incelenmeden önce diğer hücresel materyallerden ayrılmalıdır. Hücrenin çevresinde bulunan ve DNA korunmasını ve paketlenmesini sağlayan hücresel proteinler DNA analizini inhibe eder. Bu nedenle, DNA ekstraksiyonu(izolasyonu) metotları DNA molekülünün proteinlerini ve diğer materyallerini ayırmaya yönelik geliştirilmiştir.
DNA izolasyonu yapılırken; çevre şartları, kontaminasyon, elde edilen DNA’nın miktarı ve saflığı önemlidir.
Manuel DNA/RNA Ekstraksiyon Yöntemi
Nükleik asit izolasyon kitleri genelde spin-kolon yöntemi ile çalışır, pipetleme, ısıtma, santrifüj etme gibi tüm adımlar kullanıcı tarafından yapılır. DNA ve RNA’nın kalitesi kişinin becerisine, laboratuvar ortamının durumuna ve kulanılan kitin kalitesine göre değişmektedir.
Tam Otomatik DNA/RNA Ekstraksiyon Yöntemi
Kullanıma hazır kartuşlara solüsyon haldeki örneği yükleyip, insan eli değmeden (robotik olarak) tüm işlerin yapılarak saf DNA veya RNA’nın elde edilmesidir.
Örnek solüsyon halde değil ise ön hazırlığı yapılır, (Ör: Kemik, Kas dokusu, yaprak, tohum vb) Bu ön işlem için manuel yöntemler veya otomatik homojenizatörü kullanılır.
Bilgi-1 : Klinik Örneklerin Ön Hazırlığı
Bilgi-2 : Diagnostik Tanı Kiti Uygulama Protokolü
Elde edilen DNA veya RNA’ların saflık ve miktar tayinleri Mikro Hacimli Spektrofotometre (Denovix Marka DS-11 serisi tavsiyemizdir) ile yapılır.
Elde edilen DNA/RNA’lar, amplifikasyon kitleri (PCR veya Real Time PCR Premiks’ler) kullanılarak sonuç alınır ve analiz edilir.
Elde edilen DNA veya RNA’ların saflık ve miktar tayinleri Mikro Hacimli (Denovix Marka) Spektrofotometre ile yapılır.
