Nükleik Asitlerin Saflık ve Konsantrasyon Ölçümü

Nükleik Asitlerin Saflık ve Konsantrasyon Ölçümü

Nükleik Asitlerin Saflık Ölçümü

Nükleik Asit (DNA, RNA) örnekleri 260nm, Proteinler 280 nm dalga boylarında maksimum absorbansa sahiptir. Bu iki dalga boyunda elde edilen absorbansların oranı bize ‘saflık’ derecesini verir. Benzer şekilde 230nm dalga boyunda elde edilen absorbanslar ‘Kontaminasyon’ olarak kabul edilir. Nükleik Asitler için saflık değerini 260/230 oranı verir. Beklenen saflık değeri; DNA ölçümleri için : ~ 1,8 RNA ölçümleri için : ~ 2,0 kabul edilir.

denovix, gen plaza, nanodrop, genplaza, mikro hacimli, spektrofotometreÖrnek Ölçüm Ekran Görüntüsü

260/230 oranı düşük ise : Numune veya ekstraksiyon prosedüründeki bir hatayı Gösterir, 230 nm’de Nükleik asit kontamisyonu vardır. Ör: dsDNA için ölçüm yapılıyorsa RNA kontaminasyonu vardır.

Düşük 260/230 oranının sebepleri:

  • Karbonhidrat taşınması (genelde bitkilerde oluşur)
  • Ekstraksiyon aşamasında ‘Fenol’ atığı
  • ‘Guanidin’ atığı (genelde kolon bazlı kitlerde olur)
  • Çöktürme için kullanılan ‘Glikojen’ sebep olabilir.  

260/280 oranı düşük ise; Protein veya Fenol kontaminasyonu gösterir.

Düşük 260/280 oranının sebepleri:

  • Kirli fiber optik yüzeyde yapılan ‘Blank’ işlemi.
  • Farklı PH değerindeki ‘Blank’ solüsyonu kullanımı.
  • TE ile çözülmüş örnekler için ‘Su’ kullanımı.

Yardım